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    公开号:WO1989000425A1
    申请号:PCT/JP1988/000686
    申请日:1988-07-08
    公开日:1989-01-26
    发明作者:Kazuoki Ishihara；Masonori Ito
    申请人:Kabushiki Kaisya Advance；
    IPC主号:C12P1-00
    专利说明:
    [0001] 明 細 書
    [0002] 過酸化脂質減少剤
    [0003] 枝術分野
    [0004] 本発明は、 乳酸菌及びコ ゥボの菌体を有効成分とする過酸 化脂質減少剤に関する。 さ らに述べる と、 ェ ンテ π コ ソ カス 属、 ラ ク トバシラス属、 ビフ ィ ドバク テ リ ゥム属及びノ又は サ .ン カ ロマイ セス属に属する微生物の菌体を有効成分と して 舍有する過酸化脂質減少剤に関する。 本明細書において 「過 酸化脂質」 とは一般的に脂質の過酸化物を意味し、 例えばリ
    [0005] 4 )
    [0006] ノ ール酸、 ォ レイ ン酸、 ァラキ ド ン酸の過酸ィ を挙げる こ と ができ る。
    [0007] 背景技術
    [0008] 食品中に含まれる過酸化脂質は、 消化管粘膜等を障害し、 又、 その一部は生体内に取り込まれ、 さまざまな影響を与え る こ とが知られている。 例えば生体内で不飽和脂肪酸を多 く 含んでいる細胞膜に過酸化脂質が生成される と種々 の酵素の 活性低下をきたすこ と、 膜の性状が劣化し、 例えば赤血球が 溶血を起しやす く なり 、 又、 血管壁が硬化し、 種々 の組織に 形態的変性が生じる こ となどが報告されている。 これらの諸 現象が重複して、 現実には動脈硬化、 酵素機能の低下、 網膜 症、 白内障、 糖尿病といった老化性の機能退行が現われる と 考え られている。 現在このような症犾を緩和、 回復させるためには、 トコフ ュロール、 ァスコルビン酸等の抗酸化剤が主として使用され ている。 しかし、 これらはそれ自身非常に酸化され易く 、 そ の効力を保持させる点で問題があり、 又、 食品添加物である ために、 単独での摂取は望ま し く ない。
    [0009] 上記に鑑み、 本究明者らは鋭意研究の結果、 ある種の乳酸 菌及びコ ゥボに過酸化脂質を著し く減少させる効果のあるこ とを知見し、 本発明に至ったものである。
    [0010] 即ち、 本発明の目的は、 食品中又は消化管中の過酸化脂質 を減少させるこ とのできる菌体生成物を提供することにある。 本発明の別の目的は、 乾燥状態に保てば、 過酸化脂質滅少カ の減弱が認められず-に長期にわたつてその効果を持続させる こ とが可能な菌体生成物を提供するこ とにある。 さ らに、 食 品として単独での摂取も行ない得る菌体生成物を提供するこ とにある。
    [0011] 本発明の更に他の目的は、 以下の説明により一層明らかに なるであろう。 発明の開示
    [0012] 本発明は、 ェ ンテロコ ッカス属 （Enterococcus) 、 ラク ト ノ、'シラス属 （Lactobacillus)、 ビフ ィ ド ノ クテリ ゥム属
    [0013] (Bifidobacterium)又はサ ッ 力 口 マィ セ ス) =禹 ( Saccarotn i ces ) に属する ί¾生物から得られる生菌体、 死菌体及びそれらの不 溶性成分からなる群から選んだ少な く とも 1種を有効成分と して舍有する過酸化脂質缄少剂に閬する も である。 本発明は、 別の観点によれば、 ェンテロコ ン カ ス ' フエ シ ゥ ム A D 1060 (FERM BP - 1926) 、 ラ ク ト ノ シ ラ ス ' サ リ パリ ウ ス A D 0003 (FE M BP- 1927) 及びサ ッ カ ロ マ イ セ ス ' セ レ ビシヱ 155-77 (FERM BP- 1928) からなる群から選んだ少な く とも 1種の、 過酸化脂質滅少活性を有する新規菌株にも関す る。 図面の簡単な説明
    [0014] 第 1 図は実施例 1 の結果を示すダラフであり、 横軸は菌体 漶度 （呢ノ mi ) 、 縦軸は過酸化脂質 ( L P 0 ) の滅少率 （％) を示す。 第 2図は、 実施例 2 の操作方法を示す流れ図である。 発明を実施するための最良の形態
    [0015] 本発明の過酸化脂質減少剤は、 前記のとおり 、 ェ：. テ ロコ 'メ カ ス属（Enterococcus)、 ラク 卜 ヾシ ラ ス ] ¾ (し actobaci l lus) ビフ ィ ド ノ、'ク テ リ ウ ム属 （Bif idobacterium)、 又はサ ッ カ ロ マイ セス属 （Saccaromices) に属する微生物、 特にはェ ンテ ロ コ ッ カ ス ' フ エ シゥ ム (Enterococcus f aec i um ) 、 向フ ヱ カ リ ス （ E . f aeca 1 i s ) 、 ラ ク ト ノ シ ラ ス ' ァ シ ド フ ィ ラ ス (Lactobaci llus acidophi lus) 、 同フ エ ノレメ ンタ ム (L. fermentum)、 同サリ ノ、' リ ウ ス （L . s a 1 i var i us )、 ビフ ィ 'ク テ リ ゥ ム · ァ ド レ ツ セ ンテス (Bif idobacterium adolecentes) 同 ロ ンガム (B. longum) 、 同ブ レべ （B. brave) ., 同 ヒフ イ ダ ム （B. bif idum)又はサ ツ カ ロ マ イ セ ス ' セ レ ピシ ェ (Saccar- omices cerev i c i ae)の 1 種又はそれ以上から調製する こ とが できる。 これらの微生物の代表例を以下の第 1表に示す。
    [0016] 第 1 表
    [0017] 菌 秩 名 寄託番号
    [0018] 1 ェ ンテロ コ ッ カ ス · フ エ シゥム FER BP - 1926 ( En ter ococcus r aec i um ) AD1060 (FER P-9414) ェ ンテロ コ ッ カス · フ エカ リ ス FERM BP - 29了 ( En terococcus f aeca lis) AD101 (FERM P-6625)
    [0019] 3 ラ ク トノ シラス ♦ ァ シ ドフ ィ ラ ス IID S93
    [0020] (し ac tobsc i 11 us acidophillus)
    [0021] 4 ラ ク ト ノ xシ ラ ス · サ リ ノ リ ウ ス FERM BP- 1927
    [0022] (Lactobacillus sal ivar ius) AD0003 (FERM P-9415
    [0023] 5 ラ ク トノ、;'シラ ス . フ エノレメ ンタ ム FERM BP - 715 、し 3C tobsc i 11 us f ermen turn) AD0002 (FERM P-7539)
    [0024] 6 ビフ ィ ドバク テ-リ ウム · ァ ド レ ツ セ ンテス RIMD 0232001 (Birxdobacterium adol ecen tes)
    [0025] 7 ビフ ィ ド ノ ク テ リ ゥ ム ' ブレべ ' F F 1-33-8
    [0026] (Biridobacterium brave) E E
    [0027] 8 ビフ ィ ドノ ク テ リ ゥム . ロ ンガム M-10-1-2
    [0028] (Bifidobacterium iongum)
    [0029] 9 サ フ カ ロ マイ セス · セ レビシェ
    [0030] ( Saccarom ices cereviciae) loo- ί ί Co 前記第 1表において、 菌株 o. 1 、 ¾ 4及び Νΰ. 9 は、 各々、 通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所 ：日本国茨城県 筑波郡谷田部町東 1 丁目 1番 3号 （郵便番号 305) : ：以下、 微ェ研 （ F R I ) と称す〕 に昭和 6 2年 6月 1 3 日から国内 寄託 （受託番号を FERM- Ρと して示す） されており、 昭和 6 3 年 6月 2 9 日からブタべス ト条約に基づく国際寄託機関と し. ての微ェ研に移管されている （受託番号を FER. -BP と して示 す） e 菌株 2 は歡ェ研 （ F R I ) おいて昭和 5 了年了月 1 5 日から国内寄託され、 昭和 5 8年 5月 3 1 日から国際寄 託に移管されている。 菌株 α 5 は微ェ研 （ F R I ) において 昭和 5 9年 3月 8 日から国内寄託され、 昭和 6 0年 2月 1 9 日から国際寄託に移管されている。 菌株 Να 3 は東京大学医科 学研究所に寄託されている。 菌株 Να 6 は大阪大学微生物病研 究所に寄託されている。 菌株 o. 7及び No. 8 はビフ ィ ズス菌セ ンターに寄託されている。
    [0031] 本発明の微生物の一般的な菌学的性質は、 同じ分類に属す る公知微生物の菌学的性質と同じである。 すなわち、 一般的 な菌学的性質、 培養方法及びその他の性質は以下の文献に記 載されている ものに相当する。
    [0032] 1 ) Ber gey s Manual of Determinative Bacteriolog ,
    [0033] 8th ed, 490-676(1974)
    [0034] 2 ) Int. J. Syst. Bact. 16, 114 (1966)
    [0035] 3 ) Poupar d , J . A . , Hus a i n , I· , and Morris, R . F .：
    [0036] Bacterid . Rev. 37, 136-165(1973)
    [0037] 4 ) 光岡知足、 日本細菌誌 24, 261- 280 (1969)
    [0038] 5 ) 農芸化学実験書 第 2卷 （ 1964) 京都大学農学部農芸 化学教室編
    [0039] 6 ) Microbiol . Immunol . 25 (3) , 257- 269 (1981)
    [0040] 7 ) J. Clin. Pathol . 33 53- 57 (1980)
    [0041] 8 ) J. General Microbiol, , 128 713-720 (1982)
    [0042] 9 ) Applied Microbiol . , 23 (6) 1131 - 1139 (1972)
    [0043] 10) 光岡知足 ： 臨床と細菌、 丄（3)， (197) 55- (233) 93, 1975 11) T . Katanafae, H . S h i m o h a s h i , V . Kawa i , . ϋ u t i： 25 (3) ,257-269, 1981
    [0044] 12) R. H. Deibel, D. E. Lake, C. F. Nieven. Jr :
    [0045] J. Bacteriol . 86» 1275 - 1282, 1963
    [0046] 前記第 1表に示した本発明による微生物の代表的な菌学的 性質を以下に要約して第 2表〜第 6表に示す。
    [0047] 第 2表 ： ェ ンテロコ ッ カス ' フエシゥム（Enterococcus
    [0048] faecium) AD1060(FERM BP- 1926)
    [0049] グラム染色
    [0050] カタラ ーゼ （煮沸血液存在下） - 1 0 てでの増殖 ―
    [0051] 4 5 'Cでの増殖
    [0052] 5 0 'Cでの増殖 + pH 9. 6 での増殖 ―
    [0053] 6. 5 % N:aC での増殖 +
    [0054] 4 0 %胆汁における増殖 -
    [0055] 1 /4000亜テルル酸での増殖 ―
    [0056] 1 %メ チレンブル一ミルクでの増殖 - 炭水化物醱酵
    [0057] ァラ ビノ ース 一 グリ セ リ ン 一 ラフ イ ノ ース ― ソ ノレヒ' ッ ト 一 ラク ト ース 一 メ レチ ト ース 一 ィ ヌ リ ン ― ェ リ、 ン + アルギニ ンよ り ア ンモニア産出 + 馬尿酸加水分解性 - 第 3表 ： ラ ク ト ノ、' シ ラ ス ' サ リ ノ リ ゥ ム （Lactobaci 11 us sali varius) AD0003 (FERM BP- 1927)
    [0058] 形 状 桿 菌 グラ ム染色 + グルコ ース力、らのガス生成 一 1 5 'c での増殖 ―
    [0059] 4 5 て での增殖 + 炭水化物醱酵
    [0060] ァ ラ ビノ ース 一 キ シ ロ ース 一 ラ ムノ ー ス 一 リ ボー ス 一 マ ンノ ース
    [0061] フノレク ト 一 ス τ ガラ ク ト ー ス
    [0062] シ ュ ク ロ ー ス
    [0063] マル ト 一 ス 一 セ 口 ビオ ー ス ― ラ ク ト ー ス
    [0064] ト レ ノ、 ロ ー ス 一 メ リ ビオ ー ス - ラ フ イ ノ ース + メ レジ ト ース
    [0065] デキス ト リ ン、 デ ンプン N . D マ ンニ ッ ト + ソゾレビッ ト + エスク リ ン + サ リ シ ン
    [0066] ァ グダリ ン 第 4表 ： サ ッ カ ロマイ セス * セ レビシュ (Saccharomyces cerevisiae) 155-77(FERM BP-1928)
    [0067] 形 状 卵 形 繁殖法 ' 出 芽 胞子形成 + 発酵性拔
    [0068] グルコ ース + フ ラル ト ース ÷ マ ンノ ース + ガラ ク ト ース + シュ 一ク ロ ース + マル ト ース + ラ ク ト ース 一 ラ フ ィ ノ ース + 沈毂酵母 - 酵母環 一 皮 膜
    [0069] ゼラチン液化
    [0070] 硝酸塩同化 第 5表 ： ェ ンテロコ ッカス ' フエカ リ ス（En terococcus faecalis) AD10KFB M BP-297)
    [0071] 細胞形状 球 状 グラム染色性 + 溶血性
    [0072] 1 0 "Cでの増殖 +
    [0073] 4 5 での增殖 + 5 0 てでの増殖 · 一
    [0074] 6 0 で 3 0分での熱耐性 + pH 9. 6培地での増殖 + メ チレンブルー還元性 + ゼラチンの液化 一
    [0075] NaC 添加 （ 6. 5 %) 培地での增殖 + 胆汁添加 （ 4 0 %) 培地での増殖 + ア ンモニア産生 + 馬尿酸水解性 土 テルライ ト添加培地での増殖 +
    [0076] T T C * 添加培地での増殖 + 炭素源からの酸生産性
    [0077] グルコ ース + エスク リ ン + ィ ヌ リ ン
    [0078] ラク ト ース
    [0079] グリ セロール
    [0080] ァラビノ ース
    [0081] メ レジ ト ース
    [0082] ソルビ ト ール
    [0083] 血清 （群抗原）
    [0084] 2 , 3 , 5 - リ フエニルテ ト ラゾリ ゥムク ロ リ ド）
    [0085] 第 6表 ： ラク トノ シラス · フェルメ ンタム (Lactobaci 1 lus f ermentum) (FERM BP- 715)
    [0086] 一 IL + +
    [0087]
    [0088] + ;隱 - ft 本発明による各菌体は以下のよ う にして調製する。
    [0089] 蒸
    [0090] 菌体塩 S酢酵留グック Lをトト 、 乳酸菌 （ェ ンテ ロ コ ッ カ ス属、 ビフ ィ ドバク テ リ 類 ¾酸母エ水Jルイ -リリ
    [0091] ゥム属及び溶 J Jナコプェプシン 1ラ ク トバシラス属の微生物） はロ ゴサ液体培地 (組成は後述液酸スチキン £）トト F に、 酵母 （サ ッ カ ロマイ セス属の微生物） は 三ステ中ケス一リ 8 s s S
    [0092] 硫安 0. 2 %、 イ ー o o oァィスゥ oス ト エキ ス 0. 2 %、 ブ ドウ糖 2 % ·、 ぺプ ト ムスン
    [0093] ン 0. 1 %を舍む液体培了 2 7モ地に接種し、 前者は 3 7 'Cで 16〜24時
    [0094] H H H
    [0095] 間、 後者は 3 0 'cで 24〜4 o o o8時間浸盪培養する。 遠心分離 (10000 g , 10m in)により集菌し、 培地の百分の一容の精製 水に懸濁し、 次いで遠心分離を行なう こ とによ つて洗菌する この洗菌体を生菌体のままで使用する こ とができ る。 或いは 121 'Cで 1 0分間の加熱殺菌処理後に乾燥 （凍結又は加熟乾 燥） して調製した死菌体を使用する こ とができ る。 ある いは さ らに、 前記の死菌体を遠心分離して調製した不溶性成分を o。 o 152 o 333 o 511
    [0096] 使用する こ と もでき る。 4 - πゴサ ^体培 ¾Lの IB ¾.
    [0097] 二ゥ a
    [0098] ( H , 121 ° 1 5 分間加熱滅菌）
    [0099] ( ) 塩類溶液 ： 蒸留水 100^中 ,守 H
    [0100] 本る発明で使用する乳酸菌のスク リ 一二ング方法は tanabe, T . , e t al,, Studies on stre tococci . I. Distribution of fecal stre tococci in man . Microbiol . Immunol. 25 257 - 269 (1981) に記載の方法に準じて行う。 すなわち、 上記文献 に記載の通り、 健康人のフィ ーシ―ズを N agar及び LBS agar に塗沬、 好気的条件下で 3 7 'c、 48〜 72時間培養し、 生成コ ロ ニーをカ ウ ン ト 、 無作為にひろい、 コ ロニー形、 力タ ラ一 ゼ陰性、 グラム染色陽性球菌及び椁菌を分離し、 生理的、 生 化学的性状を検査して分類同定した。 また、 酵母 （サ ッカ ロ マィ セ ス属の微生物） は市販パン酵母製剤より抽出した。
    [0101] 本発明の過酸化脂質減少剤は、 前記の生菌体、 死菌体又は 不溶性成分、 及び場合により医薬として許容できる担体 （例 えばデ ンプン、 結晶セルロ ース、 力 ルボキ シメ チルセル口一 ス力ルシゥム)からなる。
    [0102] 本発明の過酸化脂質減少剤は鉉ロ投与によつて摂取する こ とができ、 その用量は通常約 0. 1 〜約 5 0 / kg体重 （ i 回） 程度であり、 粒剤、 錠剤、 顆粒剤等の剤型として使用し
    [0103] 実施例
    [0104] 以下、 実施例によつて本発明を更 具体的に説明するが-、 本発明は以下の実施例によって限定されるも G)ではない s
    [0105] W下の各実施^で使用する菌^ 前記-の方法で謂製した。 また -. 過酸化脂質の調製及び測定は以下の方法に ¾つて行 過酸化脂 ¾調製法
    [0106] リ ノ -ル酸を自動酸化法又は光增感酸化法により酸化後、 薄層ク ロマ ト グラフ ィ ーにより過酸化物を分離して過酸化脂 質を調製した （参考文献 ： 過酸化脂質実験法、 金田尚志、 植 田伸夫編集、 医歯薬出版株式会社、 Agric. Biol. Chem. 35 = P33-39, 1971, 同 45, Ρ587-δ93, 1981、 汎用衛生試験法と解 説、 日本薬学会編、 南山堂、 Ρ 33、 脂質分折法入門、 藤野安 彦、 学会出版セ ンター、 P100) 。
    [0107] 過酸化脂質測定法
    [0108] 過酸化脂質の測定法は丁 Β Α法 （チォバルビッール酸法）
    [0109] (日本老年医学雑誌、 内藤周幸、 山中健、 15, P187-191, 1978) を採用した。 以下にその方法を述べる。
    [0110] 方 法
    [0111] ( 1 ) 共栓付試験管で菌体所定量と過酸化脂質 （ L P O ) 溶 液 2 とを反応させる。
    [0112] ( 2 ) 0.05 N塩酸 3. 0 を反応液 （ 1 ) に加える。
    [0113] ( 3 ) 0.67 % T B A試薬 3. 0 を加え、 混合する。
    [0114] ( ) 試験管のふたを閉じ、 沸騰水で 3 0 分間加熱する。 ( 5 ) 水冷水槽に入れ、 すみやかに室温まで冷却する。
    [0115] ( G ) n - ブタノ ール 2. 0 を加え、 振替抽出する。
    [0116] ( 7 ) 遠心分離（2500rpm, 10分間） した後、 ブタノ ー ル層
    [0117] (上層） を取り 、 535nm て比色測定する。
    [0118] 標準液と しては 1 0 nmo £ ノ テ ト ラ エ ト キ シ プロパ ン - メ タ ノ —ル瑢液を使用 した。 又、 菌体それ自体 よる 丁 E A 反応物の妨害を補正するため、 過酸化脂質を添加しない試料 についても同時に測定を行い、 この値を差し引いたものを T B A値とした。
    [0119] 過酸化脂質の濃度 （ C ) (nmo & / m ) は次の式によって求 めた。
    [0120] 試料の吸光度
    [0121] C X 1 0 (nmo I / mi ) 標準液の吸光度
    [0122] なお、 以下の実施例において、 人工腸液としては、 日本薬 局方に記載のとおり、 0. 2 Mリ ン酸ニ水素力 リ ゥム試液 250 ^及び 0. 2 水酸化ナ ト リ ゥム試液 118 に精製水を加え、 全量を 1000 として調製したものを使 した。
    [0123] 実施例 1 菌体量と L P 0減少
    [0124] Enterococcus faecium AD1060 (FER BP-1326) の生菌体 熱水処理してから凍結乾燥して得た死菌体 1 mg , 5 ^ = 1 0 mg , 1 5 mg "又は 2 G meを過酸化脂質濃度 125 / ^ , 250½r / 又は 500 / の人工腸液 2 に懸篛し、 菌体濃度 0. 5 m /' £ , 2. 0 / £■ , ο. 0 mg / £ , ,'. ο mg / £ 及び 1 G' . (i mg .ノ の実験試料を調製した。
    [0125] 前記測定法に従い、 過酸化脂質の減少率を求めた。 結果を 第 2表及び第 1図に示す。 これらから明らかなように窈果的 な過酸化脂質の璩少が認められた。
    [0126] 一
    [0127] 15
    [0128] 第 2表
    [0129]
    [0130] 0 実施例 2 菌体による食品中 L P 0の減少
    [0131] ド レ ツ シンク、' 1 g 中に Enterococcus Faecium AD1060 (FERM
    [0132] BP- 1926)を熱水処理してから凍結乾燥して得た死菌体 1 0 mg
    [0133] 3 0 , 5 0 mg又は 100 を懸濁し、 室温で 1 時間放置した 後で T B A法にて L P 0の減少率を求めた。
    [0134] 5 本実施例で用いた T B A法の手順を第 2図に示す。 結果を 第 3表に示す。 第 3表から明らかなように菌体 100 添加て は、 90.2 %もの减少が観察された。
    [0135] ^ 3_
    [0136] 1 m 体 ( ) 1 T B A値（劃 £ )： 滅少率 ( % ) ：0
    [0137] 0 1 9 q 5
    [0138] ！
    [0139] 0 ！ 1 3. 8 ！ 5 3. 2 ：
    [0140] ； ；
    [0141] 3 0 ： 4 ； 7 1. 0
    [0142] ； 0 0 ； ϋ· U , 8 3. 丄 ：
    [0143] ： '
    [0144] 1 0 0 ： 2. 9 ： 9 0. 荬施例 3 消化酵素処理後の過酸化脂質減少能
    [0145] 消化管内での本発明の過酸化脂質減少剤の效果を調べるた めに、 ペプシン、 ト リ プシン、 キモ ト リ プシン又は牛胆汁末 を加熱処理 -凍結乾燥死菌体 〔ェ ンテロコ ッカス · フエ シゥ ム AD1060 (FER.M BP-1926) 〕 （以下、 加熱乾燥死菌体と称す） に加え、 過酸化脂質减少能を調べた。 又、 有効成分を特に多 く舍むと思われる、 前記の加熱乾燥死菌休不溶成分について も実験を行った。 対照用として、 酵素で処理していない前記 の加熱乾燥死菌体の璩少率を 100とし、 詰果を第 4表：こ示し た。
    [0146] ぺプシン処 if
    [0147] 1 ) 0. 1 Mクェ ン酸緩衝液 （PH 2. 5 ) 2 miにぺプシン （和光 純薬工業社製） 0. 1 を溶解し、 前記の加熟乾燥死菌体 2 0 を懸濁させ、 3 7 °cで 4時間処理した。 これに過
    [0148] . 酸化脂質 lOOOA'gを加え、 1時間後に T B A注で過羧化脂 質量を測定した。 菌体を加えず同様の操作をしたものを コ ン ト ロ ールとして、 過酸化脂質渡少率 Aを求めた。
    [0149] 素で処理していない前記の加熟乾燥死菌体 2 0 及び過 酸化脂質 1000 を舍む人工腸液中ての過羧化 質滤少率 Bを求め、 Eで Aを除し、 100を乗じてペプシ ン ¾理 加熱乾燥死菌体の過酸化脂質滅少率を算出した。
    [0150] 2 ) 上記と同様にしてペプシ ン処理を 4時間行った後、 遠心 分離により不溶成分を集め . これに蒸留水 1 0 を加え、 再懸濁遠心分離を 2度缲 返して実施し、. 不溶成分を洗 つた。 これを凍結乾燥後 冷凍乾爆の代りに、 S O t:て 加熱乾燥したものについても同様の結果が得られた） 、 過酸化脂質 1000 を舍む人工腸液 2 m£に加え、 1 時間後 に T B A法にて過酸化脂質量を測定し、 過酸化脂質減少 率 Cを求めた。 Cを上記 Bで除し、 100を乗じて、 不溶 成分の減少率を箕出した。
    [0151] ト リ プシ ン処理及びキモ ト リ プシ ン処理
    [0152] 0. 1 M リ ン酸緩衝液 （ pH 7. 5 ) 2 に ト リ プシ ン又はキ モ ト リ プシ ン （和光純薬工業社製） 0. l mgを溶解し、 ペプシ ン 処理と同様の方法で過酸化脂質減少率を求めた。
    [0153] 加熱乾燥死菌体不溶成分
    [0154] 前記の加熱乾燥死菌体 2 0 を水 に懸濁し、 6 0 "C で 1 0分間保ち、 遠心分離により不溶部を集め、 ぺプシ ン処 理 2 ) に準じ、 過酸化脂質減少率を求めた。
    [0155] 汁末 _の¾
    [0156] 牛胆汁末と して、 Difco 社製 Ox - Gallを使用し、 人工腸液 に 0 , 0.05 , 0.10 , 0.15 , 0.50 %の割合で添加し、 実験を行 つ 。
    [0157] 第 4表
    [0158] 実施例 4
    [0159] 以下の第 5表に記載の各種微生物の生菌体を熱水処理して から凍結乾燥して得た死菌体 2 0 と過酸化脂質 50 () A'gとを 含有する人工腸液 について、 前記各実施例と同様にして 過酸化脂質減少率を測定した。 詰果を第 5表に示す。 , 1
    [0160] J% 564リ 2ゥ 1 寄託番号 過酸化脂質
    [0161] 減少率（％ ) ェ ンテ ロ コ ッ カ ス ♦ フ エ シゥ ム FERM BP- 1926 70 ( En terococcus f aec i um； AD1060 (FERM P-9414) ェ ンテ ロ コ ソ カ ス · フ エ カ リ ス FERM BP- 297 (En terococcus faecal is) AD101 (FERM P-6625) ラ ク ト ノ 'シ ラ ス ♦ ァ シ ドフ ィ ラ ス I ID S93 46 (Lactobacillus acidophillus)
    [0162] 名
    [0163] ラ ク ト ハ シ ラ ス · サ リ ノ Ν リ！ 5ウ ス FERM BP- 1927 52 (Lactobacillus salivarius 9)AD0003 (FERM P- 9415) ラ ク ト ノ シ ラ ス · フ エ ノレメ ンタ表 FER. BP-715 34
    [0164] 10 (Lactobacil lus fermenturo) A D 0002 (FERM P-7539)
    [0165] ビフ ィ ドバク テ リ ゥ ム RIMD 0232001 22
    [0166] • ァ ド レ ン セ ンテス
    [0167] (.Bifidobacterium adolecentes)
    [0168] ビフ ィ ドバク テ リ ゥ ム ' ブ レベ 1-53-8
    [0169] I β i f i dobac ter i um brave)
    [0170] ビフ ィ ドノ ク テ リ ゥ ム · π ンガム M - 10-1-2
    [0171] (Bifidobacterium 1 o n g u m )
    [0172] サ ッ カ ロ マ イ セ ス · セ レ ビ シ ュ FERM BP- 1928 70 (Saccaromices cere v i c i ae; LDD- ί i (FERfl P-3416) 本発明を特定の態様に ¾つて説明したか、 当業者に自明の 各種の変形は本発明の範囲に舍まれる ものてある。
    [0173] 0
    权利要求:
    Claims
    請 求 の 範 囲
    1. ェ ンテロ コ ッ カ ス属 (Enterococcus) 、 ラ ク ト ノヾシ ラ ス属 （Lactobaci 1 lus)、 ビフ ィ ドノ ク テ リ ゥ ム属
    (Bifidobacterium) -、 又はサ ッ カ ロ マ セ ス J禹 (Saccaromicesj に属する微生物から得られる生菌体、 死菌体及びそれらの不 溶性成分からなる群から選んだ少な く とも 1種を有効成分と
    2
    して舍有する過酸化脂質減少剤 o。
    2. 前記 t生物が、 ェンテ πコ ツ カ ス · フ ヱ シ ゥ ム
    (Enterococcus faecium; |。Jフ エ力 ' j ス (E,iaecalis,i フ ク ト ノヾシ ラ ス * ァ シ ドフ ィ ラ ス (Lactobacillus acidophIlius)、 同フ エノレメ ンタ 厶 (L. f ermentum)、 同サリ バリ ゥ ス
    (L. sal ivarius) , ビフ ィ ドノ ク テ リ ゥ ム ' ア ド レ フ セ ンテ (Bifidobacterium ado 1 ecen tes ) -、 同ロ ン ム (B. longunU、 同ブレべ （B. brave!；、 同ビフ イ ダ厶 （ B . b i f i (ium)及びサ ソ カ Π " Ί セス ' セ レヒ シェ (Saccaromices c e r e v i c i a e ,< ¾ ； る群から選択される 1種以上である請求の範囲第 1 項に記載 の過酸化脂質 ¾少剤。
    3. 前記微生物が、 ェンテロ カス ' フユシゥ ム; D1060 (FERM BP— 1926) 、 同フ エ 力 ス AD9001 (PERM BP— 29了 、 サ フ カ πマ イ セス · セ レビ シェ 155-了 7 (FER BP- 1928) である 請求の範囲第 1 項記載の過酸化脂質渡少剤
    • 4. 医薬と Lて許容できる担体を更に 、有する請求. '範匿 第 i 項記載の過酸化脂質滅少剤。
    3. 保存に適した乾燥した形 C.請求 G範囲第 I 項記戴の過 酸化脂質滅少剤。
    6. ェ ンテ ロ コ ッ カ ス · フ ユ シゥム AD 1060 (FERM BP- 1926) 、 ラ ク ト バシ ラ ス ' サ リ バリ ゥ ス AD0003 (FERM BP- 1927) 、 及 びサ ン カ ロ マイ セス . セ レビシ ヱ 155-了 7 (FERM BP- 1928) 力、 らなる群から選んだ少な く とも 1 種の、 過酸化脂質減少活性 を有する新規菌株。
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    1993-11-03| WWG| Wipo information: grant in national office|Ref document number: 1988906077 Country of ref document: EP |
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